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人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)培養實驗的具體方法是?

發布時間:2022-08-12瀏覽次數:335返回列表

  標簽:臍靜脈內皮細胞 古朵生物 培養基 固體培養基


  人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)培養實驗的具體方法是?


  臍靜脈內皮細胞(HUVEC)培養:

  1. 將 15-20cm 長的新生兒臍帶放入無菌的 PBS 溶液中儲存。(注:4℃下多貯存 24 小時,室溫下不超過 6 小時,否則廢棄)

  2. 用一個鈍頭的針頭扎入臍帶靜脈管中,用無菌的 PBS 溶液沖洗 3-5 次,將污血沖洗干凈為止。

  3. 用手術鉗夾緊臍帶下端,加入 15ml 的膠原酶(1mg/ml)室溫下消化 15-20分鐘,并不時上下搖動臍帶。

  4. 消化完后,將下端手術鉗松開,消化液流入一個 50 ml 無菌離心管中,用無菌的 PBS 溶液沖洗臍帶 2-3 次。

  5. 將收集液離心(2000 轉/ 分)3 分鐘。

  6. 倒去上清,加入 10ml M199 培養基(加入 10U/ml 的 bFGF) ,用彎管吹散細 胞,將所有液體轉入一個用明膠包被好的培養瓶中,37℃培養。(注:每個培養瓶中加入 3- 4ml 無菌的 1%的明膠溶液,搖勻使得明膠溶液完全 鋪滿瓶底,放入 37℃孵育,少 2 小時,用前將明膠溶液倒了即可,明膠包被 有利于細胞貼壁。 )

  7. 培養 24 小時后,倒掉培養基,并用無菌的 PBS 溶液清洗 2-3 次,洗掉紅細 胞和死細胞,加入 10 ml 新鮮的 M199 培養基。

  8. 以后每 2 天換一次培養基(每次換掉 2/3 的培養基) 。

  9. 一般培養 5-7 天,細胞可長滿至 80-90%單層,這時可以傳代。

  10. 倒掉培養基,用無菌的PBS 溶液清洗 2-3 次,加入2- 3ml 消化液(0.25%胰/酶+0.1%EDTA)消化細胞,在顯微鏡下觀察,一旦細胞變圓,即加入 2-3 倍的有血清的 DMEM 培養基終止反應。

  11. 用彎管將細胞吹打下來,并將所消化的細胞轉移到一個 50 ml 無菌離心管中,2000 轉/ 分,離心 3 分鐘。

  12. 倒掉上清,加入 10ml新鮮培基,一般一瓶細胞可傳代 3-4 瓶,以后照此傳代培養。

  13. 一般傳代 2-3 代(培養了 20 天左右)用于做各種實驗效果較好。

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